脂肪是飼料及其原料中僅次于蛋白質(zhì)的主要品質(zhì)項(xiàng)目, 目前其含量的測(cè)定普遍使用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 , 采用索氏( Soxhlet ) 抽提原理, 影響檢測(cè)結(jié)果的主要因素有樣品顆粒、抽提溶劑、抽提時(shí)間、天平和烘箱的準(zhǔn)確度、抽提裝置的性能、環(huán)境溫度、所用器具清潔度、樣品中水分含量水平、操作人員水平等。筆者在日常檢測(cè)的具體操作過(guò)程, 有時(shí)遇到檢測(cè)結(jié)果受某些因素影響而不穩(wěn)定的現(xiàn)象。為探討出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因, 我們就樣品顆粒、抽提溶劑、抽提時(shí)間這 3 個(gè)主要影響因素對(duì)魚(yú)粉、豆粕、大豆粉分別進(jìn)行分析探討和調(diào)控試驗(yàn), 結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料和方法
1.1 樣品的采集和制備
隨機(jī)選用經(jīng)廣州黃埔港入境的魚(yú)粉、豆粕、大豆粉, 樣品的抽取和制備按 SN/T 0800.1- 1999《進(jìn)出口糧油、飼料檢驗(yàn)抽樣和制樣方法》進(jìn)行。
1.2 主要儀器與試劑
磨樣機(jī), KNIFETEC 1095 型; 標(biāo)準(zhǔn)篩, BS 410/1986 ; 脂肪自動(dòng)測(cè)定儀, SZC-101上海纖檢儀器有限公司; 烘箱, DHG-9140A; 粗天平,YP502 , 感量 0.01g ; 分析天平,
FA , 感量 0.0001g ; 所需試劑主要是分析純乙醚和沸點(diǎn)范圍 30~60℃ 的石油醚( 30# )。
1.3 試驗(yàn)方法
根據(jù)日常檢驗(yàn)工作遇到的實(shí)際問(wèn)題, 就不同樣品顆粒、不同抽提溶劑、不同抽提時(shí)間, 參照現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》中的儀器法進(jìn)行脂肪含量測(cè)定。
1.4 評(píng)判依據(jù)
按現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》中對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果限差的規(guī)定來(lái)評(píng)價(jià)測(cè)定結(jié)果數(shù)據(jù)的有效性。該國(guó)標(biāo)規(guī)定: 當(dāng)脂肪含量大于或等于 10% 時(shí), 允許相對(duì)偏差為 3% ; 當(dāng)脂肪含量小于 10% 時(shí), 允許相對(duì)偏差為 5% 。
1.5 主要計(jì)算公式
1.5.1 脂肪含量
脂肪含量( % ) = ( 抽提后鋁杯恒重 - 抽提前鋁杯恒重) / 風(fēng)干試樣重量 ×100
1.5.2 相對(duì)偏差
相對(duì)偏差 = (測(cè)量值 - 平均值) / 平均值 ×100%
2 結(jié)果和分析
2.1 不同樣品顆粒大小對(duì)飼料脂肪抽提效果的影響在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》中, 脂肪成分的提取主要是通過(guò)將樣品浸泡在抽提溶劑中由抽提溶劑洗滌樣品來(lái)實(shí)現(xiàn)的。樣品顆粒的大小直接影響到樣品能和抽提溶劑接觸的廣度和深度, 這將直接影響到所測(cè)樣品脂肪成分的提取(萃取)效率。通常在相同的試驗(yàn)條件下, 樣品顆粒越小, 脂肪成分的提取( 萃取) 效率越高, 所測(cè)得樣品的脂肪含量也會(huì)高一些。在日常檢驗(yàn)工作中, 有時(shí)懷疑因樣品研磨不夠細(xì)致而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低。本文以現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 規(guī)定的 0.45mm(40 目 ) 顆粒大小為基礎(chǔ), 隨機(jī)選用魚(yú)粉原樣( 即未經(jīng)任何磨制)和經(jīng)日常研磨方式 ( KNIFETEC 1095 型磨樣機(jī),選 2s 或 5s 模式, 運(yùn)轉(zhuǎn)次數(shù)視樣品性狀而定) 制備的大豆粉、豆粕樣品作為試驗(yàn)組。對(duì)所有實(shí)驗(yàn)樣品分別用 1mm (18 目 ) 、 0.45mm (40 目 ) 、 0.212mm(70 目 ) 標(biāo)準(zhǔn)篩篩分檢查樣品顆粒大小的分布情況,
詳見(jiàn)表 1 。對(duì)將作為參照組的樣品, 如有0.45mm 篩上物的增加磨制時(shí)間, 直到全部過(guò)0.45mm 篩。然后, 對(duì)所有樣品用乙醚作抽提溶劑, 浸泡 15min 、淋洗 45min 進(jìn)行脂肪含量檢測(cè),結(jié)果見(jiàn)表 1 。
由表 1 “粒度分布”欄可以看到, 作為參照組的大豆粉、豆粕、魚(yú)粉樣品, 我們嚴(yán)格按現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 的規(guī)定, 制備至 100% 過(guò)0.45mm 標(biāo)準(zhǔn)篩, 對(duì)作為試驗(yàn)組的樣品, 大豆粉、豆粕經(jīng)日常研磨方式處理后 0.45mm 篩上物分別為 52% 、 41% , 其中 1.00mm 以上顆粒分別占 2% 、4% , 魚(yú)粉樣品為入境卸貨原狀, 未經(jīng)任何研磨,0.45mm 篩上物為 36% , 其中 1.00mm 以上顆粒占5% 。從表 1 “乙醚抽提效果”欄可以看出, 無(wú)論是參照組, 還是試驗(yàn)組, 大豆粉、豆粕、魚(yú)粉的每一對(duì)平行樣品之間的相對(duì)偏差均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T6433- 1994 規(guī)定的允許相對(duì)偏差, 這表明經(jīng)日常研磨方式 ( KNIFETEC 1095 型磨樣機(jī), 選 2s 或 5s 模式, 運(yùn)轉(zhuǎn)次數(shù)視樣品性狀而定)制備的樣品, 雖然未能達(dá)到 100% 過(guò) 0.45mm 標(biāo)準(zhǔn)篩的要求, 但兩者的抽提效果在實(shí)驗(yàn)誤差范圍之內(nèi)。表 1 結(jié)果提示對(duì)大豆粉、豆粕、魚(yú)粉樣品, 顆粒研磨至 1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以達(dá)到現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 的規(guī)定。
2.2 不同抽提溶劑對(duì)飼料脂肪檢測(cè)結(jié)果的影響

現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》中規(guī)定用分析純乙醚作為抽提溶劑。乙醚又名二乙醚, 由濃硫酸與乙醇共熱至 130~140℃ 時(shí)蒸餾而制得, 沸點(diǎn) 34.5℃ , 相對(duì)密度0.714 , 易溶于乙醇和氯仿等, 是良好的抽提試劑。 但乙醚蒸氣和空氣的混合物極易爆炸, 爆炸極限為 1.85%~36.5% ( 體積)。另外, 用于脂肪抽提實(shí)驗(yàn)后的乙醚, 由于含有較多氧化物, 其收集、儲(chǔ)存、回收等方面存在安全隱患。因此, 我們選用較為安全的石油醚, 沸點(diǎn)范圍 30~60℃ , 相對(duì)密度0.63~0.66 。石油醚由天然石油或人造石油經(jīng)分餾而得, 主要是戊烷和己烷等低分子量烴類(lèi)的混合物, 也是無(wú)色可燃易揮發(fā)澄清液體, 不溶于水, 溶于大多數(shù)有機(jī)溶劑, 能溶解油和脂肪, 多用做溶劑或化學(xué)試劑。我們參照現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T6433- 1994 中儀器法, 分別對(duì) 3 個(gè)大豆粉、 3 個(gè)豆粕和 3 個(gè)魚(yú)粉共 9 個(gè)樣品分別用乙醚和石油醚作為抽提溶劑進(jìn)行浸泡 15min 、淋洗 45min 的試驗(yàn), 結(jié)果見(jiàn)表 2 。
由表 2 可以看到, 無(wú)論是屬于植物性物質(zhì)的大豆粉、豆粕樣品, 還是屬于動(dòng)物性物質(zhì)的魚(yú)粉樣品, 每一對(duì)平行樣品之間的相對(duì)偏差均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 規(guī)定的允許相對(duì)偏差。此外, 不同飼料種類(lèi)的各個(gè)樣品兩種抽提溶劑的檢測(cè)結(jié)果都非常接近, 兩者的平均值之差分別為大豆粉: -0.06% 、 -0.17% 、 0.28% ,豆粕:0.30% 、 0.17% 、 0.17% , 魚(yú)粉: 0.18% 、 0.06% 、 -0.02% 。由此可見(jiàn), 用乙醚和與乙醚沸點(diǎn)相近的石油醚作為抽提溶劑來(lái)檢測(cè)大豆粉、豆粕、魚(yú)粉中脂肪含量的效果是一致的。事實(shí)上, 用石油醚替代乙醚作溶劑已是現(xiàn)代分析檢測(cè)工作的趨勢(shì), 本結(jié)果“驗(yàn)證”了其替代的合理性。
2.3 不同浸洗時(shí)間對(duì)飼料脂肪抽提效果的影響由于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》的原理屬于重量分析法, 所測(cè)得樣品脂肪含量的數(shù)值與該樣品在浸提前后兩者的質(zhì)量差值有直接聯(lián)系, 相同試驗(yàn)條件下, 隨著浸提時(shí)間的延長(zhǎng), 該樣品在浸提前后兩者的質(zhì)量差值會(huì)增大, 所測(cè)得樣品的脂肪含量也會(huì)高一些。在日常檢驗(yàn)實(shí)踐中, 我們有時(shí)懷疑因浸洗時(shí)間過(guò)短而導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果偏低, 本文以脂肪自動(dòng)測(cè)定儀 ( 2050 型)操作說(shuō)明書(shū)推薦的抽提時(shí)間60min ( 其中浸泡 15min , 淋洗 45min ) 為基礎(chǔ), 分別增設(shè)浸泡 30min 、淋洗 45min 和浸泡 15min 、淋洗 90min 兩種抽提方式, 對(duì)日常檢驗(yàn)工作量較大的飼料用大豆粉、魚(yú)粉以乙醚作抽提溶劑進(jìn)行試驗(yàn)?；緦?shí)驗(yàn)過(guò)程的數(shù)據(jù)和計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表 3 。
由表 3 可見(jiàn), 隨著浸泡、淋洗時(shí)間的延長(zhǎng), 檢測(cè)結(jié)果有增加的趨勢(shì)。浸泡 30min , 淋洗 45min 的檢測(cè)結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)浸泡 15min 、淋洗 45min ) 的結(jié)果平均值之差分為: 大豆粉 0.08 , 1 號(hào)魚(yú)粉 0.04 , 2號(hào)魚(yú)粉 0.19 。浸泡 15min 、淋洗 90min 時(shí)檢測(cè)結(jié)果與浸泡 15min 、淋洗 45min 的結(jié)果平均值之差分別為大豆粉 0.19 , 1 號(hào)魚(yú)粉 0.19 , 2 號(hào)魚(yú)粉 0.38 ,前者均值為 13.43%±6.18% , 明顯大于后者均值12.97%±5.91% , 兩者差值為 0.47% , 相對(duì)偏差為1.74% , 配對(duì) t 檢驗(yàn) t=- 3.481 , P=0.018 。這說(shuō)明不同抽提時(shí)間對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義, 但因相對(duì)偏差 1.74% 也遠(yuǎn)低于現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T6433- 1994 規(guī)定的允許相對(duì)偏差, 實(shí)際意義不大。由 此 可 見(jiàn) , 浸 泡 30min 、 淋 洗 45min 和 浸 泡15min 、淋洗 90min 與浸泡 15min 、淋洗 45min 的抽提效果, 在實(shí)驗(yàn)誤差范圍內(nèi)是一致的。
3 結(jié)論和建議
本文結(jié)合筆者在日常檢測(cè)的具體操作過(guò)程和檢驗(yàn)工作實(shí)踐中, 遇到檢測(cè)結(jié)果受某些因素影響而有結(jié)果出入的現(xiàn)象, 以常用飼料原料魚(yú)粉、豆粕、大豆粉做研究對(duì)象, 通過(guò)對(duì)樣品顆粒、抽提溶劑、抽提時(shí)間這 3 個(gè)影響脂肪含量測(cè)定的主要因素分別進(jìn)行分析探討和調(diào)控試驗(yàn), 初步結(jié)果表明: ( 1 ) 對(duì)大豆粉、豆粕、魚(yú)粉樣品, 顆粒研磨至1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以達(dá)到現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 的規(guī)定; ( 2 ) 用乙醚和與乙醚沸點(diǎn)相近的石油醚作為抽提溶劑來(lái)檢測(cè)大豆粉、豆粕、魚(yú)粉中脂肪含量的效果是一致的;( 3 ) 浸泡 30min 、淋洗 45min 和浸泡 15min 、淋洗90min 與浸泡 15min 、淋洗 45min 的抽提效果, 在實(shí)驗(yàn)誤差范圍內(nèi)是一致的。
在現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 《飼料粗脂肪測(cè)定方法》中, 脂肪成分的提取主要是靠有機(jī)溶劑來(lái)萃取, 萃取過(guò)程中, 除脂肪外, 還有有機(jī)酸、磷脂、脂溶性維生素、色素等也溶到萃取液中, 最終留在浸提鋁杯里與脂肪一起恒重, 影響試驗(yàn), 所以該國(guó)標(biāo)也說(shuō)明測(cè)定結(jié)果為“粗脂肪”或乙醚提取物。因此筆者建議: ( 1 )樣品顆粒研磨至1.00mm 以下, 脂肪抽提效果就可以達(dá)到現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) GB/T 6433- 1994 的規(guī)定; ( 2 ) 為消除安全隱患, 可選用沸點(diǎn)范圍為 30~60℃ 的石油醚來(lái)代替乙醚作抽提溶劑; ( 3 ) 抽提時(shí)間以脂肪自動(dòng)測(cè)定儀操作說(shuō)明書(shū)推薦的 60min ( 其中浸泡 15min ，淋洗 45min )為宜。